Вирусная геморрагическая болезнь кроликов: источник инфекции, распространение, лечение, профилактика

В январе этого года сотрудники Федерального исследовательского центра вирусологии и микробиологии (ФИЦВиМ) обнаружили на территории России очередной случай вирусной геморрагической болезни кроликов (ВГБК) нового типа. ВГБК проявляется внезапно и приводит к массовой гибели животных. О том, что известно сегодня об этом заболевании, траектории его распространения, методах диагностики и мерах профилактики – в обзоре научных сотрудников Самарского и Саратовского НИВИ – филиалов ФИЦВиМ. Материал подготовили младшие научные сотрудники СамНИВИ Анастасия Глазунова и Дарья Лунина, директор СамНИВИ Ольга Кустикова, директор СарНИВИ Светлана Коннова, зам. директора по НИР СамНИВИ Павел Ильясов.

Вирусная геморрагическая болезнь кроликов (ВГБК, RHD) – остро протекающее высококонтагиозное заболевание, вызываемое калицивирусом (род Lagovirus, семейство Caliciviriade), поражающее европейского кролика (Oryctolagus cuniculus) и характеризующееся проявлениями тромбогеморрагического синдрома во всех органах, особенно в легких и печени [1–3].

В настоящее время известно два серотипа вируса RHD, которые получили названия RHDV и RHDV2 (RHDVb) [4]. Описан ряд вариантов RHDV [5]. При этом клиническая картина заболевания, вызываемого RHDV и RHDV2, несколько различается, а в зависимости от серотипа вируса, вызвавшего заболевание, применяются соответствующие вакцины и методы лечения [6].

Заболевание сопряжено с большим экономическим ущербом, поскольку по действующим ветеринарным правилам все кролики в неблагополучном хозяйстве подлежат немедленному убою [1, 3, 4].

Что известно о вирусе?

Возбудитель RHD – безоболочечный РНК-содержащий вирус. Род Lagovirus также включает вирус EBHSV, который вызывает синдром зайца-русака – заболевание, очень похожее на RHD. Несмотря на их высокое генетическое сходство (идентичность нуклеотидной последовательности гена VP60 составляет 70%), RHDV и EBHSV – это два различных вида [4, 7, 8].

Сравнение нуклеотидных последовательностей и антигенов, а также эпидемиологические данные указывают на существование трех основных групп RHDV:

1. «Классический RHDV» впервые появился в КНР в 1984 году [9]. На сегодняшний день этот вирус, зарегистрированный более чем в 40 странах Азии, Африки, Америки, Европы и Океании, является эндемическим заболеванием в большей части государств, где европейские кролики живут в естественных условиях или одомашнены [4].

2. Подтип RHDVa/G6, впервые выявленный в Европе в 1996 году [10, 11], к настоящему времени распространился на территории других частей света (Океании, Азии и Америки [4]).

3. «Новый» RHDV (условно называемый RHDV2 или RHDVb) появился во Франции в 2010 году у диких и выращенных на ферме вакцинированных кроликов [12–14] и быстро распространился в Европе и регионах Средиземноморского бассейна (Мальта и Тунис), а также в Австралии в 2015 году. По данным [13], RHDV2 произошел не от классического RHDV. Антигенные данные позволили классифицировать RHDV2 как второй серотип RHDV [4].

Рис. 1. Классификация патогенных лаговирусов [6]

В результате серологического исследования RHD [15–18] в Италии был обнаружен непатогенный лаговирус, родственный RHDV и названный RCV. Различные авторы выделяют этот вирус в отдельный вид или считают непатогенными штаммами RHDV. Впоследствии данный лаговирус регистрировался в других странах Европы, а также в Австралии и Океании [15, 19–23]. Этот вирус вызывает скрытую инфекцию кишечного тракта, не сопровождающуюся клиническими признаками, но вызывающую серологический ответ, который может усложнять диагностику RHD [16, 18, 21, 24, 25].

Источник инфекции

RHD характеризуется высокой контагиозностью. В экспериментах доказана передача пероральным, назальным, подкожным, внутримышечным или внутривенным путем, а также механическая передача через мух, других насекомых и диких животных [26].

Источником инфекции являются больные и переболевшие кролики. Здоровые кролики заражаются в основном респираторным путем при совместном содержании с больными и переболевшими животными [27], а также посредством фомитов, включая загрязненную пищу, воду и подстилку. Кроме того, один из основных путей передачи вируса в новые районы – импорт зараженного мяса кролика, причем вирус выживает при замерзании.

Вирус устойчив в окружающей среде. Его вирулентность не снижается при обработке эфиром, хлороформом, трипсином; при нагревании в течение 1 часа до 50°C. Возбудитель стабилен в диапазоне рН от 4,5 до 10,5; устойчив к pH 3,0, но инактивируется раствором формалина или теотропина или при рН>12 [26] и температуре 4-37 °С в течение суток. При температуре -40°С вирус сохраняется более пяти лет [28].

Восприимчивые животные

ВГБК поражает диких и одомашненных кроликов вида Oryctolagus cuniculus.

Другие виды кроликов, включая Sylvilagus floridanus, Lepus californicus и Romerolagus diazzi, не восприимчивы.

Зайцы-русаки (Lepus europaeus) и другие виды зайцев (L. timidus, L. corsicanus, L. capensis) не подвержены классическим штаммам RHDV / RHDVa.

Клиническая картина

Вирус может инфицировать кроликов всех возрастов, однако у животных моложе 6–8 недель инфекция носит субклинический характер. Патогенетический механизм устойчивости к вирусу RHD классического антигенного подтипа у молодых животных все еще не ясен. У 5–10% кроликов моложе 4–6-недельного возраста отмечают подостро-хроническую форму RHDV/RHDVa.

Течение заболевания у взрослых кроликов (старше 40–50 дней) может быть сверхострым, острым, подострым или хроническим.

Сверхострая RHD протекает без симптомов. Животные могут погибнуть через два-три дня после инфицирования [1, 3].

Клиническая картина проявляется главным образом при острой инфекции такими признаками, как анорексия, апатия, прострация, нервные симптомы (судороги, атаксия, паралич, опистотонус), респираторные симптомы (одышка, пенистые и кровавые выделения из носа), цианоз слизистых оболочек. При этом инкубационный период RHDV/RHDVa варьируется в пределах от одного до трех дней, а гибель наступает через 12–36 часов после начала лихорадки (> 40°C) [4, 26].

Подострая форма характеризуется схожими, но более сглаженными признаками.

Особенности клинической картины при RHDV2 заключаются в следующем: гибель подсосных крольчат с 15-дневного возраста, а клинические признаки проявляются в течение более длительного периода (от трех до пяти дней). Причем у большинства кроликов отмечается подостро-хроническое проявление заболевания. Смертность при RHDV2 ниже, но сильно варьируется (от 5% до 70%); среди экспериментально инфицированных кроликов смертность составляет 20% [29].

Дифференциальный диагноз

ВГБК необходимо дифференцировать от пастереллеза, сальмонеллеза, колибактериоза, миксоматоза, эймериоза, отравления, солнечного и теплового ударов.

Образцы для исследования

В качестве образцов можно использовать свежую и замороженную печень [3], свежую селезенку и кровь, а также формалинизированные вышеуказанные органы, легкие и почки [1, 26].

Печень содержит самый высокий вирусный титр (от 10³ LD50 до 10⁶ LD50 / мл 10% гомогената), позволяет идентифицировать как RHDV, так и EBHSV. Количество вируса, присутствующего в других частях тела, прямо пропорционально их васкуляризации [4].

Методы диагностики

RHDV не поддается культивированию в культуре клеток (для изоляции вирусов). Тем не менее данное заболевание можно диагностировать путем выявления вирусных нуклеиновых кислот и/или антигенов в тканях и крови.

Для диагностики чаще всего используют метод ПЦР. В настоящее время наборы на ПЦР разработаны для всех подтипов вируса. Вирусную РНК можно обнаружить во многих органах (особенно в печени), а также в крови, моче и кале. Кроме того, ее можно обнаружить в крови уже переболевших кроликов в течение длительного времени.

Другие методы для выявления вирусной РНК включают ПЦР с обратной транскрипцией и секвенирование, которые описаны в литературных источниках, и часто используются в научных исследованиях.

Вирусные антигены часто обнаруживают методом ИФА (ELISA). Кроме того, данный метод позволяет обнаруживать антитела в организме переболевших кроликов в течение продолжительного времени.

Для обнаружения RHDV можно также использовать электронную микроскопию. В печени больного животного содержится высокий титр вируса, в большом количестве его можно обнаружить в селезенке и крови. При длительном течении болезни вирус RHD легче обнаружить в селезенке, чем в печени.

Для диагностики заболевания подходят тесты на основе гемагглютинации, сэндвич-ИФА, вестерн-блоттинга [4, 26].

Траектория распространения

RHD впервые обнаружили зимой 1983 г. в провинции Цзянсу Китайской Народной Республики [9]. Вспышка распространилась среди ангорских кроликов, причем в течение девяти месяцев погибли 14 млн животных [27].

Вирус достиг Европы в 1988 г., где быстро распространился. В 1992 г. заболевание было зарегистрировано в Великобритании. К концу 1990-х годов RHD распространилась по территориям 40 стран и стала эндемической в популяциях диких зайцев и дикого кролика в Европе, Австралии, Новой Зеландии и на Кубе. В это же время в Европе наблюдался стремительный рост объемов исследований RHD, что было обусловлено актуальностью проблемы и большими экономическими потерями в кролиководстве [27].

В 2010 г. первую вспышку нового вида вируса (RHDV2) зафиксировали во Франции [13]. Затем вспышки заболевания, вызванного данным вирусом, регистрировались в Италии, Испании в 2011 г., в Португалии – в 2012 г. Вирус генетически и антигенно отличался от классического вируса RHD и был способен частично преодолевать иммунитет к нему.

Что касается СССР, России и ближнего зарубежья, то с 1987 г. болезнь регистрировали в пяти областях Украины (Сумская, Харьковская, Киевская, Запорожская, Одесская), в Белоруссии, Молдове, Латвии, Узбекистане, Казахстане и Туркменистане.

В России ВГБК впервые появилась в 1986 г. на Дальнем Востоке в пограничном с Китаем совхозе «Дальневосточный». Тогда специалисты, не диагностировав заболевание, своевременно убили кроликов на Биробиджанском мясокомбинате, а около 5 тыс. шкурок отправили на Воскресенскую фетровую фабрику. Оттуда болезнь начала распространяться по Московской области и другим регионам России [1]. К 1987 году болезнью был поражен 31 регион страны.

В 2006 г. в Белгородской области Российской Федерации был впервые обнаружен вариант подтипа вируса RHDVa. В начале 2010-х вспышки вирусной геморрагической болезни кроликов были зарегистрированы в Саратовской и Курской областях.

В 2014 г. информационно-аналитический центр Россельхознадзора сообщил о вспышке RHDV2 в Челябинской области. В 2018 г. вирус RHDV2 был выделен от павших кроликов в Тверской и Московской областях [38]. Картографические данные по вспышкам в данных регионах представлены на рисунке 2.

Рис. 2. Эпизоотическая ситуация в мире за последние пять лет по данным МЭБ [39]

В 2015 году официально подтверждены вспышки вирусной геморрагической болезни кроликов в Австралии, Швеции, Дании, Норвегии, Бенине (Африка) и Тунисе.

В 2016 году, по сообщениям МЭБ, вирусная геморрагическая болезнь кроликов регистрировалась в Дании (4), Ирландии (2), Норвегии (2), Финляндии (1), Швейцарии (4), Швеции (1), Кот-Д’Ивуа́р (Африка) (5), Канаде (2), Австралии (3).

Начиная с 2017 года вспышки RHDV2 были отмечены в Австралии (1), Дании (7), Финляндии (1), Норвегии (2). Ситуация кардинально изменилась в 2018 году, когда был зафиксирован 21 очаг RHDV2 в таких странах, как Канада (11), Израиль (8), Россия (2). Кроме того, были выявлены вспышки RHDVa в Новой Зеландии (1) и RHDV в США (1). Данные о вспышках в мире за 2017–2018 гг. представлены на рисунке 3.

Рис. 3. Эпизоотическая ситуация по ВГБК в мире за период с 01.01.2017 по 31.01.2019

 Экономический ущерб

Основной экономический ущерб складывается от массовой гибели животных, доходящей до 100%. Большие затраты также связаны с проведением ограничительных и ветеринарно-санитарных мероприятий [40].

Лечение и вакцины

Для лечения разработана специфическая сыворотка против ВГБК, которая обладает лечебным действием после однократного введения в объеме 0,5 см даже в период развития первичных клинических признаков болезни. Эффективность лечебного действия сыворотки в производственных условиях в период эпизоотии ВГБК составляла от 90 до 97%.

Во избежание летального исхода от ВГБК у домашних декоративных кроликов, для устранения возможных потерь поголовья в хозяйствах применяется несколько вакцин. Наиболее распространенные из них – «Песторин» (производство «Биовета», Чехия), «Геморрагивак» («Био-Тест-Лаборатория», Украина), вакцина против ВГБК тканевая инактивированная (г. Покров, Россия), вакцина против ГБК тканевая инактивированная гидроокисьалюминиевая (г. Покров, Россия), вакцина против ГБК (производства Сумской биофабрики, Украина), инактивированная масляная вакцина «Ривак» («Мевак», Словакия).

В ФИЦВиМ изготовлен образец вакцины против ВГБК-2 и продолжается работа по изучению ее эффективности и безопасности.

Меры профилактики

Профилактика ВГБК заключается в строгом выполнении ветеринарно-санитарных правил кролиководческими хозяйствами, предприятиями и частными владельцами животных. При появлении болезни хозяйство объявляется неблагополучным, вводятся ограничения. Больных и подозрительных по заболеванию кроликов отправляют на убой, трупы утилизируют. Остальных кроликов вынуждено вакцинируют вакциной против ВГБК независимо от сроков предыдущей вакцинации.

Дезинфекцию проводят 5%-ным раствором хлорамина, 2%-ным раствором формальдегида, раствором гипохлорита кальция с 5%-ным содержанием активного хлора. Шкурки от кроликов из неблагополучных хозяйств дезинфицируют в ходе технологической обработки. Мясо от здоровых кроликов из неблагополучных пунктов проваривают и реализуют в пределах неблагополучной административной территории.

Важные условия предотвращения распространения ВГБК:

1.    Своевременное информирование владельцев о заболевании.

2.    Соблюдение и повышение мер биобезопасности в хозяйствах.

3.    Осуществление мониторинга среди диких кроликов и зайцев, анализ риска.

4.    Для предотвращения распространения ВГБК2 необходимо доработать и зарегистрировать вакцину, подготовить препарат для массового производства.